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北京六一電泳小知識-電泳分類

Posted on 2020-05-13 16:16:20 by , 0

區(qū)帶電泳

是在一定的支持物上,在電場作用下,在均一的緩沖液體系,樣品中帶正或負(fù)電荷的離子分別向負(fù)或正極以不同速度移動,分離成一個個彼此隔開的區(qū)帶。這是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛的電泳技術(shù)。區(qū)帶電泳按支持物的物理性狀不同,又可分為紙和其他纖維膜電泳、淀粉電泳、凝膠電泳。

等電點聚焦電泳

凝膠中加入兩性電解質(zhì),在電場強(qiáng)度下形成PH梯度。樣品在電泳中,環(huán)境PH大于其PI時帶負(fù)電荷,向正極移動,環(huán)境的PH小于其PI時帶正電荷,向負(fù)極移動,當(dāng)泳動到其自身特有的等電點時,其凈電荷為零,泳動速度下降到零,具有不同等電點的物質(zhì)最后聚焦在各自等電點位置,形成一個個清晰的區(qū)帶,分辨率極高。

電泳技術(shù)方法

 

電泳種類很多,電泳的原理基本相同,但不同的支持物或凝膠又有各自的特點。

1 紙電泳

2 薄層電泳

3 薄膜電泳

4 瓊脂糖凝膠電泳

5 聚丙烯酰胺凝膠電泳

6 毛細(xì)管電泳

薄膜電泳

以醋酸纖維制成的薄膜作為支撐體的電泳稱為薄膜電泳。 醋酸纖維是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經(jīng)乙?;?。 將之溶于丙酮等有機(jī)溶劑中,即可涂布成均一細(xì)密的微孔薄膜, 厚度約以0.1-0.15mm為宜。 醋酸纖維素薄膜與濾紙相比較,有以下優(yōu)點:

1.分離效果好。對蛋白質(zhì)樣品吸附極少,無拖尾現(xiàn)象,染色后背景能完全脫色,各種蛋白質(zhì)染色帶分離清晰,因而提高了定量測定的精 確性。

2.快速省時。由于親水性較濾紙小,電滲作用小,電泳時大部分電流是由樣品傳導(dǎo)的,所以分離速度快,電泳時間短,一般電泳45-60min即可,加上染色、脫色,整個電泳完成僅需90min左右。

3.靈敏度高,樣品用量少。血清蛋白電泳僅需2μL血清,故常用于檢測在病理情況下微量異常蛋白的改變。

4.應(yīng)用面廣。某些蛋白在紙上電泳不易分離,如胎兒甲種球蛋白、溶菌酶、胰島素、組蛋 白等用醋酸纖維素薄膜電泳能較好地分離。

5.易保存,易定量。醋酸纖維素薄膜電泳染色后,經(jīng)冰乙酸、乙醇混合液或其他溶液浸泡 后可制成透明的干板,有利于掃描定量及長期保存。

由于醋酸纖維素薄膜電泳操作簡單、快速、價廉。目前已廣泛用于分析檢測血清蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、酶、多肽及其他生物大分子。


醋酸纖維素薄膜電泳

1.儀器: 中低壓電源、 DYCP-38C電泳槽 、WD-9404型超級加樣器

2.試劑: (1)pH8.6 巴比妥緩沖液:二乙基巴比妥酸,二乙基巴比妥 鈉;

(2)染色液:麗春紅S ,三氯乙酸;

(3)漂洗液:95%乙醇,冰醋酸 ;

(4)透明液:無水乙醇,冰醋酸。

3、介質(zhì):醋酸纖維素薄膜,7×9cm等

醋酸纖維素薄膜電泳注意事項:

1.粗糙面點樣. 1-2μl為宜

2.恒流電泳:電流強(qiáng)度0.4~0.6mA/cm

3.pH8.6 巴比妥緩沖液(離子強(qiáng)度0.06)

4.染色5min即可

5.固定保存:將干燥的電泳圖譜膜條放入透明液中浸泡10–15分鐘后,取出貼于潔凈玻璃板上,干燥后,即為透明薄膜圖譜。


 

 
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