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北京六一電泳小知識(shí)-電泳

Posted on 2020-05-11 13:53:28 by , 0

電泳
電泳是帶電顆粒在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。 在一定pH條件下,每一種分子都具有特定的電荷(種類和數(shù)量)、大小和形狀,在一定時(shí)間內(nèi)它們在相同電場中泳動(dòng)速度不同,各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動(dòng)帶。這就是帶電粒子可以用電泳技術(shù)進(jìn)行分離、分析和鑒定的基本原理。

 


影響泳動(dòng)度的因素

1. 電場強(qiáng)度:

電場強(qiáng)度是指每厘米的電位降,也稱電位梯度(電勢梯度)。電場強(qiáng)度越高,則帶電顆粒泳動(dòng)越快。根據(jù)電場強(qiáng)度的不同,電泳可分為: 常壓(100-500V)電泳。其電場強(qiáng)度為2-10V/cm。分離時(shí)間較長,從數(shù)小時(shí)到數(shù)十小時(shí) ,適合于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。如我廠生產(chǎn)的DYY-6D、 6C、 8C等 高壓(2000-10000V)電泳。其電場強(qiáng)度為50-200V/cm,電泳時(shí)間很短,有時(shí)只需幾分鐘。多用于分離氨基酸、多肽、核苷酸、糖類等小分子物質(zhì)。如DYY-15D、 DYY-12型、 DYY-12C、 DYY-10C、 DYY-11型

2 溶液的性質(zhì)

1)PH值

溶液的PH決定帶電顆粒的解離程度,也即決定其帶靜電荷的量。對蛋白質(zhì)而言,溶液pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn),則顆粒所帶的凈電荷越多,泳動(dòng)速度也越快;反之,則越慢。因此分離某種蛋白質(zhì)混合液時(shí),應(yīng)選擇合適的pH,使欲分離的各種蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量有較大的差異

2)離子強(qiáng)度

溶液的離子強(qiáng)度一般在0.02-0.2之間,電泳較合適。若離子強(qiáng)度過高,則會(huì)降低顆粒泳動(dòng)速度;若離子強(qiáng)度過低,則緩沖能力差,往往會(huì)因?yàn)槿芤篜H值的變化而影響泳動(dòng)度的速率


3)溶液黏度

泳動(dòng)度與溶液黏度是成反比關(guān)系

3 顆粒性質(zhì)

顆粒直徑、形狀以及所帶靜電荷量對泳動(dòng)度有較大的影響。一般來說,顆粒的靜電荷量越大,或其直徑越小,或其形狀越接近球形,在電場中的泳動(dòng)速度就越快。反之,則越慢

4 電滲

電泳緩沖液相對于固體支持物的移動(dòng)稱電滲。當(dāng)支持物不是絕對惰性物質(zhì)時(shí),常會(huì)因?yàn)橹С治锷洗嬖诘碾x子基團(tuán)如羧基、羥基等吸附電極溶液中的正離子,使靠近支持物的溶液層相對帶電,向負(fù)極移動(dòng),反之,若支持物的離子基團(tuán)吸附溶液中的負(fù)離子,則溶液層向正極移動(dòng)。電滲作用會(huì)影響顆粒的泳動(dòng)度,因此,在電泳時(shí),電滲小些為好。


5 焦耳熱 電泳時(shí)會(huì)產(chǎn)生焦耳熱,使介質(zhì)粘度下降,分子運(yùn)動(dòng)加快,遷移率增加,同時(shí)溫度過高會(huì)使樣品中的生物大分子變性失活,因此電泳時(shí),要控制電壓或電流,也可安裝冷卻散熱裝置。如我廠生產(chǎn)的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷卻循環(huán)裝置,可與WD-9412A型恒溫循環(huán)器配套使用

Q=I2Rt

Q-釋放出的熱量,I-電流強(qiáng)度,R-電阻,t-電泳時(shí)間

6.支持物

現(xiàn)代電泳多在固體支持物上進(jìn)行,使樣品中的不同組分形成不同的區(qū)帶,稱區(qū)帶電泳。電泳結(jié)束后,支持物可以方便地進(jìn)行染色等后續(xù)處理。 對支持物的一般要求是均勻,吸附力和電滲小,機(jī)械性能好,便于染色或紫外光下檢測,故最好透明,無紫外吸收。常用支持物有濾紙,醋酸纖維素薄膜,淀粉凝膠,聚丙烯酰胺凝膠,瓊脂糖凝膠等 支持物性質(zhì)不同也會(huì)影響泳動(dòng)速率,如瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠都有大小不同的篩孔,在篩孔大的凝膠中溶質(zhì)顆粒的泳動(dòng)速率快,反之則慢。

 
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